DirectPCR Lysis Reagent (Cell) 細胞直接PCR裂解液

【單瓶試劑，細胞裂解+PCR一步到位】

產品關鍵詞：

Viagen Biotech; DirectPCR^® 直接PCR；PCR genotyping 基因分型；Proteinase K 蛋白酶K；302-C (301-C)；

產品介紹：

Viagen DirectPCR^® DNA Extraction System（DirectPCR^® DNA提取系統）是一種單管系統，用于從小鼠尾巴，耳片，卵黃囊和培養細胞內快遞制備DNA。Viagen Biotech, Inc科學家開發的專li組分（正在申請專li）允許用DirectPCR® DNA Extraction System獲得的DNA提取物與基因分型用的基因組PCR兼容。生物樣本的粗提物與許多分子生物學級的試劑比如PCR都難以兼容，部分原因在于粗提物內含有抑制劑。DirectPCR®不僅介導生物樣品的快速裂解，而且含有抑制劑，能夠有效抑制PCR擴增用粗提裂解物中存在的抑制效應，同時zui大程度保持釋放出來的基因組DNA的完整性。專li申請中的DirectPCR®操作起來，完quan消除任何溶液轉移或開管步驟，根本上節省了大量時間和精力。

產品特點：

1）省時：更少的動手時間；尾巴裂解液粗提物即可用于PCR；

2）省錢：僅需成本的反應流程；

3）安全：無有機試劑；

4）環保：更少消耗（有機試劑，管子，槍頭等等）

5）可靠有效：保證高產量

簡單流程：

1）用DirectPCR®裂解細胞；

2）85℃孵育45min；

3）取1μl裂解液進行PCR基因型研究。

詳細流程：

1）10cm細胞培養板細胞，使用添加新鮮制備的0.2-0.4mg/ml蛋白酶K的200-300μl DirectPCR®Lysis Reagent (Cell) 細胞裂解液重懸細胞。蛋白酶K在DirectPCR®中穩定保存~24h。如果處理少量細胞，會很難稱量蛋白酶Kfen末，可直接使用Viagen提供的基因組PCR級的蛋白酶K溶液（Cat#501-PK），使用濃度為0.5-1.0mg/ml（每1ml DirectPCR®中加入25-50μl蛋白酶K溶液）?！咀⒁狻浚喝羰褂眯×考毎?，可用去離子水稀釋DirectPCR®高達10倍，然后使用合適更多體積的裂解液用于PCR。見表1，DirectPCR®Lysis Reagent (Cell)起始使用條件。

2）置于旋轉雜交爐中，55℃轉動管子處理5-6h或直到看不見組織團。若有必要，能過夜裂解樣本，不會影響效率。完quan裂解至關重要。要想獲得更具有重復性的結果，中途搖動一下瓶子以更換管子的位置一次，最好在處理2-3h之后。

3）水浴鍋內85℃孵育粗提液45min?！究蛇x】于步驟4）前離心10s沉淀毛發。粗提液可置于-20℃保存1年（或4℃保存1周），不會降低效率。

4）每50μl PCR反應體系加入0.5-1.0μl裂解液。推薦PCR用Qiage Hotstar Taq DNA polymerase或Sigma JumpStart Taq DNA polymerase。

表1，DirectPCR®Lysis Reagent (Cell) 起始使用條件。

* Lysis using rotation hybridization oven. 

** Lysis using rocking plate. Wash cells in 96-well plate twice with phosphate buffered saline and add 60 µl DirectPCR Reagent (Cell), which has been 2-fold diluted.  Incubate at 55°C overnight. Place the 96-well plate in the wet chamber and float the chamber on the 85°C water bath for 1.5 hrs.  Pipette up and down several times. Take 1 µl of lysates for PCR.

訂購信息：Viagen Biotech原裝，現貨供應，產品銷售到全球上千家公司和科研單位，包括Merck，Fisher，Gentaur，Cosmo, Applied stemcell, Genetech，pFizer等等。

下載：DirectPCR Lysis Reagent (Cell) Protocol Manual

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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